Invitrogen™
Platinum™ Taq Hot-Start DNA Polimeraz Enzim Kiti

• 60°C’de evrensel astar tavlaması—astar tavlamasının optimizasyonunu basitleştirir; farklı PCR (Polimeraz Zincir Reaksiyonu) hedeflerinin birlikte çevrimi ile birden fazla PCR çalışmasının üstesinden gelmeye yardımcı olur
• 4 kat daha hızlı DNA sentezi ve yüksek inhibitör toleransı – son derece sağlam, tasarlanmış bir Taq polimeraz kullanır
• Platinum hot-start teknolojisi—PCR özgüllüğünü, hassasiyetini ve verimini artırır; oda sıcaklığında reaksiyon kurulumuna izin verir
• Yeşil tampon biçimleri—doğrudan jel yükleme ile pipetleme hatalarının azaltılmasına yardımcı olur

Hot-Start PCR Nedir?

Evrensel Tavlama Protokolü

Geleneksel PCR reaktiflerini kullanan PCR deneyleri, değişen primer tavlama sıcaklıkları ve farklı uzatma adımı süreleri nedeniyle her DNA parçasının amplifikasyonu için özel protokoller gerektirir. Bu nedenle, aynı PCR çalışmasında bireysel testler amplifiye edilemez. Platinum II Taq Hot-Start DNA Polimeraz ile, evrensel primer tavlama sıcaklığı ve amplifiye edilecek en uzun parça için seçilen uzatma adımı ile aynı protokol kullanılarak farklı PCR testleri paralel olarak döngüye alınabilir.

Ayrıca Platinum II Taq Hot-Start DNA Polimeraz, “hızlı” bir DNA polimerazdır; bu nedenle, bu yeni nesil DNA polimerazın ve evrensel protokolün kombinasyonu, tüm tahlillerin 30 dakika gibi kısa bir sürede hızlı çevrimine izin verir.

 

Platinum II Taq Hot-Start DNA Polimeraz, daha kısa ve daha uzun amplikonların birlikte çevrimini sağlar. 132 bp, 251 bp, 1,005 bp ve 3.9 kb fragmanlar, Platinum II Taq Hot-Start DNA Polimeraz veya diğer sıcak-start DNA polimerazları kullanılarak 50 μL reaksiyonlarında 50 ng insan genomik DNA’sından amplifiye edildi: (A) NEB OneTaq Hot Start DNA Polimeraz, (B) Qiagen Fast Cycling PCR Kiti, (C) Roche FastStart Taq DNA Polimeraz. Belirtilen tavlama ve uzatma ayarları ile dört hedefin tümü için aynı protokol kullanıldı. Boyut işareti Thermo Scientific ZipRuler Express DNA Ladder 2’dir.

Platinum™ Taq Hot-Start DNA Polimeraz ile Hızlı Döngü

Platinum II Taq Hot-Start DNA Polimeraz, artan DNA sentez hızına sahip tasarlanmış bir enzimdir. Bu nedenle, Platinum II Taq Hot-Start DNA Polimeraz PCR sonuçları ile diğer sıcak-start Taq DNA polimerazlarından genellikle 2 kat daha hızlıdır.

 

Hızlı döngü, PCR çalışma süresini azaltır. 50 ng insan genomik DNA’sından 529 bp’lik bir fragmanın 50 μL’lik reaksiyonlarda 35 döngü için amplifikasyonu, Platinum II Taq Hot-Start DNA Polimeraz ve diğer tedarikçilerden gelen sıcak başlangıçlı DNA polimerazları kullanılarak gerçekleştirildi: (A) Sigma-Aldrich KAPA2G Fast HotStart PCR Kiti, (B) NEB OneTaq Hot Start DNA Polimeraz, (C) Promega GoTaq G2 DNA Polimeraz, (D) Toyobo Quick Taq HS DyeMix, (E) Roche FastStart Taq DNA Polimeraz ve (F) Sigma-Aldrich JumpStart Taq DNA polimeraz. Her polimeraz için döngü süreleri mor renkle gösterilirken, ProFlex PCR Sistemindeki rampa süreleri (6°C/sn pik blok rampa hızı) kırmızı ile gösterilir. %1 TAE agaroz jellerinde PCR ürün analizi grafiğin altında sunulmaktadır. Boyut işareti, ZipRuler Express DNA Ladder 2’dir.

 

PCR DNA Polimeraz ile Yüksek Hassasiyet ve Özgüllük

Platinum II Taq Hot-Start DNA Polimeraz’ın yüksek hassasiyeti, sınırlı miktarda başlangıç materyali bulunan veya numunede hedef DNA’nın düşük konsantrasyonda olduğu deneylerde spesifik ürünün başarılı amplifikasyonunu sağlar.

Düşük miktarda giriş DNA’sından yüksek hassasiyet ve güvenilir amplifikasyon. 0’dan 529 bp’lik bir fragmanın amplifikasyonu (şablon kontrolü yok); 0.016; 0.08; 0.4; 2; 10; 50; 250 ng insan genomik DNA’sı, Platinum II Taq Hot-Start DNA Polimeraz veya rakip DNA polimerazları (A—KAPA2G Fast HotStart, B—NEB OneTaq Hot Start, C—Promega GoTaq G2, D—Sigma JumpStart) kullanılarak 50 μL PCR reaksiyonlarında amplifiye edildi. Taq ve E—Takara Taq HS Perfect Mix). Tahmini kopya sayısı, 0.016 ng insan genomik DNA’sı başına ~5 kopyadır. Moleküler ağırlık markörü ZipRuler Express DNA Ladder 2’dir.

İnhibitörlere Karşı Direnç

Platinum II Taq Hot-Start DNA Polimeraz, inhibitörlere karşı direnç için tasarlanmıştır ve optimal olmayan saflıkta örneklerle başarılı amplifikasyonun sağlanmasına yardımcı olur.
 

İnhibitörlere karşı direnç. Platinum II Taq Hot-Start DNA Polimeraz veya rakip DNA polimerazları (A—KAPA 2G Robust HotStart, B—NEB OneTaq Hot Start, C—Promega GoTaq G2 ve D—Takara Taq Hot) kullanılarak insan genomik DNA’sından 1 kb’lik bir fragmanın amplifikasyonu Başlangıç Sürümü) aşağıdakileri içeren reaksiyon karışımlarında: 1-hümik asit (1,3 µg/mL’lik nihai konsantrasyona kadar), 2-hemin (6 µM’lik nihai konsantrasyona kadar), 3-ksilan (0,26 mg/mL’lik nihai konsantrasyona kadar) ) veya 4—hiçbir inhibitör kontrolü yok. Moleküler ağırlık markörü ZipRuler Express DNA Ladder 2’dir.

PCR DNA Polimeraz ile Etkin Amplifikasyon

Platinum II Taq Hot-Start DNA Polimeraz ve 2X Master Karışımlarının formülasyonu, AT açısından zenginden GC açısından zengine kadar çok yönlü hedeflerin amplifikasyonuna izin verir. Yüksek GC içeriğine sahip hedeflerin spesifik amplifikasyonu ve geliştirilmiş verimleri için ayrı bir Platinum GC Enhancer şişesi sağlanır.

 

AT açısından zengin ve GC açısından zengin hedeflerin sağlam amplifikasyonu. Artan GC içeriğine sahip çeşitli DNA fragmanları (karşılık gelen şeritlerin üzerinde belirtilmiştir), 50 uL PCR reaksiyonlarında 100 ng insan genomik DNA’sından amplifiye edildi. Platinum GC Enhancer, >%65 GC’ye sahip hedefler için kullanıldı. Moleküler ağırlık markörü ZipRuler Express DNA Ladder 2’dir.

Sanger Sequencing ile Uyumluluk

Platinum II Taq Hot-start DNA Polimeraz tarafından üretilen PCR fragmanları, Sanger dizilimi için iyi çalışır. Enzimin üstün performansı, evrensel primer tavlaması ve hızlı sentezi, Sanger dizilemesi için kolay ve basit bir şekilde PCR amplikonlarının üretilmesini sağlar.
 

Platinum II Taq Hot-start DNA Polimeraz ile amplifiye edilen 1.6 kb’lik bir PCR fragmanı, Applied Biosystems 3130xl Genetic Analyzer kullanılarak Sanger sekanslandı. Yerleşik sıralama analiz yazılımının KB basecaller’ı tarafından rapor edilen veriler gösterilir. Net aralıklı okuma uzunluğu (CRL), belirli bir Kalite Değerinde (QV) en uzun kesintisiz baz segmenti olarak tanımlanır. QV20, baz çağrı hatası olasılığının %1’ine karşılık gelir ve QV30, %0,1’e karşılık gelir. QV>20, çoğu durumda yüksek kalite ve kabul edilebilir olarak kabul edilir.

Daha fazla bilgi için tıklayınız.